CRISPR/Cas9基因编辑稳转细胞株构建
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    CRISPR/Cas9基因编辑稳转细胞株构建
    发稿时间:2017-07-07 11:19:15  【字体:      

          PPL质粒共享库基于其庞大的慢病毒质粒库、CART研发平台,对外提供稳转细胞株构建与筛选服务。


    服务项目: 

           基因敲除细胞系建立  
           基因敲入细胞系建立  
           基因定点突变细胞系建立 


    服务流程:

    1、预实验:客户提供靶细胞,我们进行靶细胞培养(特殊细胞需要客户提供培养基)

    2、设计高效的sgRNA

    3、构建sgRNA/Cas9表达载体。

    4、使用构建好的表达载体转染靶细胞。

    5、挑选单克隆扩大培养

    6、多个单克隆基因组测序。

    7、选择发生变异的单克隆进行TA克隆测序。

    8、挑选阳性单克隆细胞株进行验证。

    9、对目标单克隆扩大培养,交付细胞株(≧1)。


    客户提供:

    目的基因序列信息(Gen Bank Accession number、Gene ID、关键词); 
         细胞类型及名称(也可选择由PPL代购),细胞培养条件。

    最终交付:
          sgRNA序列; 
          基因敲除/敲入/突变单克隆细胞系; 
         sgRNA-Cas9基因敲除/敲入/突变质粒鉴定测序结果; 
         结题报告(包括实验步骤、测序结果及相关原始图片)。






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