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    circRNA生物功能验证
    基本信息
      Catalog number: circRNA-bio
      Description:

    circRNA过表达

    PPL通过设计、验证和优化,筛选出可特异性准确过表达circRNA分子的载体。载体含有表达circRNA的成环结构,转染细胞后可通过RNA剪接形成circRNA分子。

    *过表达效率高:circRNA表达载体带有高效环化框架。

    *表达稳定性好:成功构建并验证百余例长度各异的circRNA载体

    *序列环化准确:有效保证目标circRNA的线性序列准确环化。

    服务选项:

    l  普通瞬转载体、慢病毒载体、腺相关病毒载体可选

    l  慢病毒载体GFP、Puromycin可选或同时表达

    l  慢病毒载体可瞬时转染,也可包装慢病毒滴度液

    l  可根据需求进一步筛选circRNA过表达稳转细胞株


    circRNA干扰

    PPL提供circRNA干扰载体设计与构建,针对circRNA的接头序列设计siRNA序列特异性敲低目的circRNA的表达。对于每条选定的siRNA靶序列,构建慢病毒shRNA载体,实现对特定circRNA特异性敲低的作用。

    l  针对每个circRNA设计3个靶点shRNA,及阴性对照

    l  提供细胞(客户提供)转染后,qPCR检测干扰效率

    l  慢病毒载体可瞬时转染,也可包装慢病毒滴度液

    l  可根据需求进一步筛选circRNA基因敲低细胞株

     

    circRNA验证及qPCR引物设计

    circRNA qPCR检测是高通量筛选后验证的必选实验,是circRNA后续功能研究或分子标志物筛选的基础。circRNA因其成环的结构,其qPCR引物设计不同于其他RNAPPL根据circRNA的闭合环形结构,设计跨接头处上下游引物,能有效与线性RNA区分开来,排除线性RNA干扰。PPL技术团队拥有丰富的qPCR经验,为您提供专业的circRNA qPCR引物设计,并进行下游的circRNA验证。



    circRNA荧光素酶报告检测

    circRNA荧光素酶报告基因实验适用于验证circRNA sponge功能,是检测circRNA和靶标microRNA特异性结合的重要手段。将circRNA特定片段插入到荧光素酶报告基因载体,将要检测的microRNA与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系,加入特定的荧光素酶底物,通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性,从而判断miRNA-circRNA的相互作用。

    服务内容
    1)构建circRNA荧光素酶报告基因质粒
    2)合成miRNAmimics或构建miRNA表达质粒

    3)根据实验分组,将(1)和(2)质粒共转待检细胞;
    4)多功能酶标仪检测报告基因的表达水平。

     

                                      更多完整的circRNA完整课题合作,欢迎咨询!
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