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    Lenti-EGFRVIII CAR滴度液
    基本信息
      Catalog number: LC0008
      Description:

    一、产品类别

    货号

    内容

    规格

    滴度

    LC0008-1

    1GLenti-EGFRVIII CAR滴度液

    5*200μL

    108TU

    LC0008-2

    2GLenti-EGFRVIII CAR滴度液

    5*200μL

    108TU

    LC0008-3

    3GLenti-EGFRVIII CAR滴度液

    5*200μL

    108TU

    LC0008-4

    4GLenti-EGFRVIII CAR滴度液

    5*200μL

    108TU

    LC0008-5

    5GLenti-EGFRVIII CAR滴度液

    5*200μL

    108TU

    二、产品简介

    EGFR与肿瘤的发生发展有着密切关系,以EGFR作为抗肿瘤治疗的研究取得很好进展。但是ERGF在正常组织也有表达,给实际治疗带来负面影响。而EGFRVIII突变体仅在恶性肿瘤细胞表达,是很有潜力的肿瘤治疗靶点。

    PPL科研型Lenti-CAR系列产品均采用EF1a启动子表达GFP基因,CMV启动子表达CAR基因,便于通过荧光显微镜或流式细胞仪检测慢病毒转导效率,而且可以避免GFP对CAR表达水平产生影响。

    三、结构示意图

    四、产品特点

    1、scFv验证有效;

    2、低内毒素水平,可直接感染活化T细胞;

    3、高转导效率,转导效率可达60%以上;

    4、保存条件:-80℃。

    五、使用方法

    Lenti-CAR转导活化T细胞

    (1)收集活化T细胞 将活化T细胞收集于15 ml离心管,400 g,离心5 min,并用RPMI 1640完全培养基重悬细胞,计数,然后均分至5个1.5 ml离心管,每管400 µl。

    (2)设置不同MOI转导组 为了获得满意的感染效率,建议设置5组不同的MOI值(MOI 1、5、10、20、40),并根据MOI值、每组T细胞数量以及Lenti-CAR病毒滴度(TU)计算每组感染所需要添加的病毒量。

    (3)病毒转导 根据计算结果在每管中加入相应量病毒液,将T细胞和病毒混合物置于37 ˚C培养箱静止30 min。

    (4)共孵育结束后每管添加 0.5 ml 完全培养基(100U IL-2 和 5 µg/ml polybrene), 混匀后转移至 24 孔板。 
    (5)将 24 孔培养板置于 37 ˚C 培养箱继续培养。 
    (6)根据细胞增殖情况,适时更换培养基并扩大培养体系。


    T细胞转导效率检测

        T细胞转导96小时后,可对T细胞转导效率进行检测,通过荧光显微镜初步判断转导率或根据以下步骤利用流式细胞仪进行准确分析:

    (1)轻轻吹打孔内细胞,转移至1.5 ml离心管,400g,离心5 min,弃去上清后先用PBS重悬细胞。

    (2) 取出大约1×106的细胞进行流式检测,通过GFP信号分析转导效率,同时可以通过相应抗体对T细胞进行CD4+和CD8+的分群分析。

    六、注意事项

    •       收到病毒液后请于-80 ℃或更低环境中保存(若存放于4 ℃,请于一周内用完)。如需多次使用,请分装后保存,避免反复冻融,以免降低病毒滴度。病毒可于-80 ℃稳定保存约6个月,超过此期限后,请重新检测病毒滴度。

    •       PPL提供的慢病毒单位标识为TU/ml, 即每毫升慢病毒液中含有具有生物活性的慢病毒颗粒数。如:病毒滴度为>1×108 TU/ml,即每毫升病毒液中至少含有1×108个具有生物活性的病毒颗粒。“TU” 为 “Transducing Units” 的缩写,中文为转导单位,表示可以感染并进入到目标细胞群中的病毒基因组数。

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