1、细胞复苏:将含有1 ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中快速摇晃至溶解,移入离心管中,加入4 ml培养基混合均匀,500g,离心5 min,弃上清液,加完全培养基重悬细胞,移入培养瓶培养,第二天更换培养液并检查细胞密度。
2、细胞传代:当细胞密度达80%-90%,可进行传代培养。对于悬浮细胞,参考以下方法传代培养:
a 收集细胞,500g,离心5 min,弃上清液,补加1~2 ml培养液后吹打均匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含完全培养基的培养皿或瓶中。
b 可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含新鲜培养基的培养皿或瓶中。
c 细胞密度保持在4 *10^5 至 3*10^6 cells/ml,根据细胞密度每2~3天补液1次。
3、细胞冻存:收集细胞,500g,离心5 min,弃上清液,加入1 ml细胞冻存液(含20% FBS+10% DMSO)轻轻悬浮细胞,移入冻存管后进行冻存。
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