1、细胞复苏:将含有1 ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中快速摇晃至溶解,移入离心管中,加入4 ml培养基混合均匀,500g,离心5 min,弃上清液,加完全培养基重悬细胞,移入培养瓶培养,第二天更换培养液并检查细胞密度。
2、细胞传代:培养2~3天,根据细胞密度和培养基消耗情况进行传代培养。
a 收集细胞,500g,离心5 min,弃上清液,用1ml完全培养液重悬细胞, 按1:5 ~1:5的比例传代细胞。
b 细胞密度保持在4 *10^5 至 3*10^6 cells/ml,根据细胞密度每2~3天补液或传代。
3、细胞冻存:收集细胞,500g,离心5 min,弃上清液,加入1 ml细胞冻存液(含20% FBS+10% DMSO)轻轻悬浮细胞,移入冻存管后进行冻存。
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