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    pLenti- SV40 small T-puro慢病毒滴度液
    基本信息
      Catalog number: CI0005
      Description:

    pLenti- SV40 small T-puro慢病毒滴度液

    一、包装清单

    货号

    内容

    规格

     

    滴度

    CI0005

    pLenti- SV40 small T慢病毒滴度液

    5*200μL

     

    108TU

    二、产品简介

    SV40是简单的真核细胞病毒,SV40的T抗原片段是最常用的目的片段,将其整合入靶细胞核内并表达,可导致细胞增殖活力的改变并表现出多种与肿瘤相关的转化表型。SV40病毒基因组早期基因编码两种肿瘤抗原(tumor antigen,T抗原),其分子量分别为94000 (大T抗原)和17000 (小T抗原)。

    T抗原有以下的作用: 1、大T抗原为细胞转化的启动所必需; 2、转化细胞表型的维持必需要有大T抗原的连续表达; 3、小T抗原对于细胞的转化不是必需的,但可起加强作用。

    本产品为SV40小T抗原过表达慢病毒质粒包装而成的病毒滴度液,含有嘌呤霉素(Puromycin)抗性基因。

    三、产品特点

    1、即开即用型产品,省去包装工序;

    2、滴度≥108TU/ml,避免反复冻融;

    3、根据细胞易感程度,建议病毒稀释比1:10-1:100;

    4、使用时请添加转染增强剂polybrene。

    四、使用方法(请根据实际实验设计,本方案仅供参考)

    进行慢病毒感染实验时可使用完全培养液(培养目的细胞用)稀释。培养液中的血清、双抗或其他营养因子不会影响慢病毒的感染效率。

    以 24 孔培养板为例,进行 HEK293 细胞的感染实验操作步骤如下:

    1、 细胞的准备

    Day-1  在 24 孔培养板接种若干孔,每个孔内接种HEK 293 细胞,铺板时细胞的融合率为50%左右,每孔培养液体积为 300μL,进行病毒感染时细胞的融合率约为70%左右。

    2、 感染目的细胞

    Day-2  根据实验的实际情况和 MOI 值,用培养液准确稀释慢病毒原液。(可使用无血清培养液稀释病毒原液。) 在目的细胞和对照细胞中分别加入计算好的病毒液, 混匀后放于二氧化碳培养箱(37 ℃、5% CO2)孵育过夜。

    注意事项:

    1)感染前细胞的状态好坏对最终的感染效果高低影响很大,请务必保证加入病毒前, 细胞处于良好的生长状态。

    2)若慢病毒对目的细胞的感染效率较低,可通过提高 MOI 值提高病毒的感染效率,也可在培养液中加入助感染试剂 polybrene来提高病毒的感染效率。

    3、更换培养液

    Day-3  病毒感染细胞 8-16小时后,更换培养液。

    注意事项:换液具体时间需视细胞状态而定。如果慢病毒对细胞有明显毒性作用,影响细胞生长状态,最短可于加病毒 8小时后更换新鲜培养液后继续培养。

    4、药物筛选

    Day-4  病毒感染细胞48小时后,以适当浓度的Puromycin进行药物筛选(需提前做药物杀伤曲线以确定合理的Puromycin浓度)。

    5、继续培养和性状测定

    Day-6 Puromycin进行药物筛选2天后,将细胞传代。用普通培养基继续培养细胞,进行相关研究。

    五、产品保存

    •      收到病毒液后请于-80 ℃或更低环境中保存(若存放于4 ℃,请于一周内用完)。如需多次使用,请分装后保存,避免反复冻融,以免降低病毒滴度。通常情况病毒可于-80 ℃稳定保存约6个月,超过此期限后,请重新检测病毒滴度。

    •      PPL提供的慢病毒单位标识为TU/ml, 即每毫升慢病毒液中含有具有生物活性的慢病毒颗粒数。如:病毒滴度为>1×108 TU/ml,即每毫升病毒液中至少含有1×108个具有生物活性的病毒颗粒。“TU” 为 “Transducing Units” 的缩写,中文为转导单位,表示可以感染并进入到目标细胞群中的病毒基因组数。

     

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