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    pQCXIN-SV40 Large T (tsA58)-neo 逆转录病毒滴度液
    基本信息
      Catalog number: CI0004
      Description:

    pQCXIN-SV40 Large T (tsA58)-neo逆转录病毒滴度液

    一、包装清单

    货号

    内容

    规格

    滴度

    CI0004

    pQCXIN-SV40 Large T (tsA58)-neo

    逆转录病毒滴度液

    5*200μL

    108TU

    二、产品简介

    SV40是简单的真核细胞病毒,SV40的T抗原片段是最常用的目的片段,将其整合入靶细胞核内并表达,可导致细胞增殖活力的改变并表现出多种与肿瘤相关的转化表型。SV40病毒基因组早期基因编码两种肿瘤抗原(tumor antigen,T抗原),其分子量分别为94000 (大T抗原)和17000 (小T抗原)。

    SV40大T抗原的温度敏感突变株tsA58表达的蛋白在允许温度(permissive temperature)33℃下有活性,在非允许温度(non-permissive temperature)39℃下失活,因而用SV40 Large T (tsA58) 永生化的细胞系具有永生化和温控性双重特性。

    本产品为SV40大T抗原温度敏感突变株tsA58过表达逆转录病毒质粒包装而成的病毒滴度液,含有新霉素(Neomycin)抗性基因。

    三、产品特点

    1、即开即用型产品,省去包装工序;

    2、滴度≥108TU/ml,避免反复冻融;

    3、逆转录病毒产品只感染处于分裂期的细胞;

    4、使用时请添加转染增强剂polybrene。

    四、使用方法(请根据实际实验设计,本方案仅供参考)

    以 96 孔培养板为例,进行细胞的感染实验操作步骤如下:

    1、感染前准备

    按实验需要将细胞铺96孔板,37℃ 培养过夜。细胞数以第2天密度约40%~60%间为宜。

    2、目的细胞的感染 

    a. 从冰箱取出逆转录病毒并在冰上缓慢融化,待完全融化后开始病毒感染实验。

    b. 吸去细胞原有培养基,加入1/2体积新鲜培养基,并往新鲜培养基里加入终浓度5~8μg/ml的polybrene (部分polybrene不耐受细胞除外)。

    c. 根据实验的实际情况和 MOI 值,换算对应的病毒原液体积,并按体积将病毒原液加入细胞中,摇匀,过夜感染病毒。

    d. 重复步骤c的操作,增加细胞感染几率(逆转录病毒只能感染生长期的细胞)。

    e. 第二次感染12~16小时后,吸去含病毒的培养液,换上新鲜的完全培养液(不含polybrene),继续37℃培养。

    3、药物筛选

    a. 首次感染72小时后,用G418进行药物筛选(需提前做好药物杀伤曲线,确定合适的药物浓度)。 

    B. 3天后用正常培养基细胞传代。24小时后换G418培养基继续筛选(G418筛选周期一般为5-7天)。

    C. 筛选完成后,用正常培养基传代,细胞用于后续实验。

    五、产品保存

    •      收到病毒液后请于-80 ℃或更低环境中保存(若存放于4 ℃,请于一周内用完)。如需多次使用,请分装后保存,避免反复冻融,以免降低病毒滴度。通常情况病毒可于-80 ℃稳定保存约6个月,超过此期限后,请重新检测病毒滴度。

    •      PPL提供的逆转录病毒单位标识为TU/ml, 即每毫升逆转录病毒液中含有具有生物活性的逆转录病毒颗粒数。如:病毒滴度为>1×108 TU/ml,即每毫升病毒液中至少含有1×108个具有生物活性的病毒颗粒。“TU” 为 “Transducing Units” 的缩写,中文为转导单位,表示可以感染并进入到目标细胞群中的病毒基因组数。

     

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