A549- mCherry -EGFP-LC3B(human)稳转细胞株-细胞自噬-产品中心-PPL质粒与蛋白共享库
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    A549- mCherry -EGFP-LC3B(human)稳转细胞株
    基本信息
      Catalog number: PY0001-1
      Description:

                       A549-mCherry-EGFP-LC3B (human)细胞株

    一、基本信息

    名称

    A549- mCherry -EGFP-LC3B(human)稳转细胞株

    货号

    PY0001-1

    包装

    1×106/ml 冻存细胞

    组织来源

    肺癌细胞系

    细胞形态

    贴壁

    重组基因

    mCherry-EGFP-LC3B (Human)

    抗性基因

    培养基

    DMEM 高糖培养基,10%胎牛血清

    消化液

    0.25%胰蛋白酶,0.53mM EDTA

    冻存液

    90%完全培养基,10%DMSO

    培养条件

    375% CO2

    运输条件

    冻存细胞干冰运输或活细胞常温运输

    储存条件

    液氮/-80

    用途

    用于标记及追踪LC3以及自噬流的变化,仅供科研实验使用

    二、产品介绍

    A549细胞稳定过表达mCherry-C1-EGFP-LC3B,条件处理导致细胞自噬发生,自噬小体进入第二阶段后,与溶酶体进行融合,形成自噬溶酶体。自噬溶酶体由于溶酶体内部的酸性环境,可以导致PH下降,EGFP因酸敏感而淬灭,因此,EGFP的减弱可指示自噬溶酶体形成的顺利程度,EGFP越少,则从自噬小体到自噬溶酶体阶段流通得越顺畅。反之,自噬小体和溶酶体融合被抑制,自噬溶酶体进程受阻。mCherry是一直稳定表达的,因而可以通过EGFPmCherry的亮点比例来评价自噬流进程。

    三、细胞培养

    1、细胞复苏:将含有1 ml细胞悬液的冻存管在37水浴中快速摇晃至溶解,移入离心管中,加入4 ml培养基混合均匀,500g,离心5 min,弃上清液,加完全培养基重悬细胞,移入培养瓶培养,第二天更换培养液并检查细胞密度。

    2、细胞传代:当细胞密度达80%-90%,可进行传代培养。对于悬浮细胞,参考以下方法传代培养:

    a 收集细胞,500g,离心5 min,弃上清液,补加1~2 ml培养液后吹打均匀,将细胞悬液按1215的比例分到新的含完全培养基的培养皿或瓶中。

    b 可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1213的比例分到新的含新鲜培养基的培养皿或瓶中。

    c 细胞密度保持在4 *10^5 3*10^6 cells/ml,根据细胞密度每2~3天补液1次。

    3、细胞冻存:收集细胞,500g,离心5 min,弃上清液,加入1 ml细胞冻存液(含20% FBS+10% DMSO)轻轻悬浮细胞,移入冻存管后进行冻存。


    五、相关产品与服务

    1GFPRPF/Luciferase标记的各种肿瘤细胞系

    2、基因过表达稳转细胞系

    3、基因敲降稳转细胞系

    六、限制性使用许可:

    1) 本产品仅供购买方单方使用,不得向任何第三方赠送、转让或销售。

    2) 本产品仅供实验室和体外研究使用,不能用于任何临床检验、诊断、治疗,或任何非法用途。


     


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